Pituduh Élmu Usum Panas: Nalika Gelombang Panas 40°C Papanggih Ékspérimén Molekul

Suhu anu luhur parantos tetep di seueur Cina ayeuna-ayeuna. Dina 24 Juli, Observatorium Météorologi Propinsi Shandong ngaluarkeun ngageter suhu luhur konéng, ngaramalkeun "sauna-kawas" hawa 35-37 ° C (111-133 ° F) jeung kalembaban 80% pikeun opat poé ka hareup di wewengkon pedalaman. Suhu di tempat-tempat sapertos Turpan, Xinjiang, ngadeukeutan 48°C (111-133°F). Wuhan sareng Xiaogan, Hubei, aya dina kaayaan waspada jeruk, kalayan suhu langkung ti 37 ° C di sababaraha daérah. Dina panas scorching ieu, dunya mikroskopis handapeun beungeut pipettes ngalaman gangguan ilahar - stabilitas asam nukléat, aktivitas énzim, jeung kaayaan fisik réagen sadayana quietly menyimpang ku gelombang panas.

Ékstraksi asam nukléat geus jadi lomba ngalawan waktu. Nalika suhu luar langkung ti 40°C, sanaos AC dihurungkeun, suhu méja operasi sering ngalayang luhureun 28°C. Dina waktu ieu, sampel RNA ditinggalkeun di kabuka nguraikeun leuwih ti dua kali gancang ti di cinyusu jeung gugur. Dina ékstraksi manik magnét, leyuran panyangga lokal jenuh alatan volatilization gancangan tina pangleyur, sarta kristal gampang precipitated. Kristal ieu bakal ngabalukarkeun fluctuations badag dina efisiensi newak asam nukléat. Volatilitas pangleyur organik naek sakaligus. Dina 30 ° C, jumlah volatilization kloroform ngaronjat ku 40% dibandingkeun 25 ° C. Salila operasi, perlu pikeun mastikeun yén laju angin dina tiung fume nyaeta 0.5m / s, sarta ngagunakeun sarung nitrile pikeun ngajaga éféktivitas pelindung.

Percobaan PCR nyanghareupan gangguan suhu anu leuwih kompleks. Réagen sapertos énzim Taq sareng reverse transcriptase sensitip pisan kana turunna suhu anu ngadadak. Kondensasi dina témbok tabung sanggeus dicabut tina freezer -20°C bisa ngabalukarkeun leuwih 15% leungitna aktivitas énzim lamun asup kana sistem réaksi. Solusi dNTP ogé tiasa nunjukkeun degradasi anu tiasa dideteksi saatos ngan ukur 5 menit paparan ka suhu kamar (>30°C). Operasi alat ogé dihambat ku suhu luhur. Lamun hawa ambient laboratorium nyaeta> 35 ° C jeung clearance dissipation panas tina alat PCR teu cukup (<50 cm ti témbok), bédana hawa internal bisa ngahontal saloba 0,8 ° C. simpangan ieu bisa ngabalukarkeun efisiensi amplifikasi di ujung plat 96-sumur turun ku leuwih 40%. Saringan lebu kedah dibersihkeun sacara teratur (akumulasi lebu ngirangan efisiensi dissipation panas ku 50%), sareng AC langsung kedah dihindari. Saterusna, nalika ngalakukeun percobaan PCR sapeuting, ulah ngagunakeun alat PCR salaku "kulkas makeshift" pikeun nyimpen sampel. Panyimpenan dina suhu 4°C langkung ti 2 jam tiasa nyababkeun kondensasi saatos tutup anu dipanaskeun ditutup, éncér sistem réaksi sareng berpotensi ngaruksak modul logam alat.

Nyanghareupan peringatan suhu luhur anu terus-terusan, laboratorium molekular ogé kedah disada alarem. Sampel RNA anu mulia kedah disimpen dina tonggong kulkas -80 °C, kalayan aksés diwatesan pikeun période suhu luhur. Muka panto freezer -20 ° C leuwih ti lima kali sapoé bakal exacerbate fluctuations suhu. Alat-alat anu ngahasilkeun panas-luhur peryogi sahenteuna 50 cm rohangan dissipation panas dina dua sisi sareng sisi tukang. Saterusna, eta disarankeun pikeun nyusun ulang timing eksperimen: 7:00-10:00 AM pikeun operasi suhu-sénsitip kayaning ékstraksi RNA jeung qPCR loading; 1:00-4:00 PM pikeun karya non-eksperimén kayaning analisis data. Strategi ieu sacara efektif tiasa nyegah puncak suhu luhur ngaganggu léngkah kritis.

Ékspérimén molekular salami gelombang panas mangrupikeun tés tina téknik sareng kasabaran. Di handapeun panonpoe usum panas anu teu lirén, sigana éta waktuna pikeun nempatkeun pipette anjeun sareng tambahkeun kotak és tambahan kana conto anjeun pikeun ngamungkinkeun alat pikeun ngaleungitkeun langkung panas. Hormat pikeun fluktuasi suhu ieu mangrupikeun kualitas laboratorium anu paling berharga salami bulan-bulan usum panas—sanggeus sadayana, dina usum panas 40 ° C, bahkan molekul peryogi "wilayah kutub jieunan" anu dijaga sacara saksama.