Faktor gangguan dina réaksi PCB

Salila réaksi PCR, sababaraha faktor anu crindingana sering ditumpukeun.
Kusabab sensitipitas pisan préd ka PFR, pédikan dianggap salah sahiji faktor anu pangpentingna tur tiasa ngahasilkeun hasil anu positif.
Sarua akurik ngandung rupa-rupa sumber anu diwangun kana hasil anu négatip-anéh. Upami salah sahiji atanapi langkung bagian-bagian penting tina campuran plbal atanapi réaksi amplifififfaktor éta dipasing atanapi silih lubung ku, askingisasi diagingna tiasa dihapus. Ieu tiasa ngakibatkeun efisiensi komo hasil négatip palsu.
Salian conibisi, leungitna target integritas asam nuklirik tiasa lumangsung kusabab pengiriman barang sareng / atanapi kaayaan panyimpen sateuacan diperyogikeun. Ieu khusus, suhu luhur atanapi neundeun anu henteu kabersihan tiasa ngakibatkeun ruksak sél sareng asam nukléat. PRerca Sel sareng Wates sareng Emagner Pardein dikeluaran panyawat DNA DNA jeung Masalah Kepala (tingali Angka 1 sareng 2). Dina kasus ieu, pamisahan optimal sareng panyebaran moal ngabantosan.

Gambar 1 | Pangaruh immobilization dina integritas DNA
Eléktroforesis gél ngaridongkeun ku kualitas DNA anu disolok tina bagian-bagian parafin tina autopses anu variunina gede. DNA tina panjang rempah-rata rata-rata hadir dina ekstrak gumantung kana padika fokasi. DNA ieu dijaga upami dibenerkeun dina conto beku asli sareng dina muchplered formalin. Pamakéan fielatif boin anu kuat atanapi henteu dikaluarkeun, formalisasi asam énergi ngahasilkeun dina leungitna DNA. Sésana fraksi pohara semprot.
Di kénca, panjang sempalan dipedar dina pasangan kilobobase (KBP)

Gambar 2 | Kaleungitan integritas asam asam nuklir
(a) jurang 3'-5 '' dua larangan bakal nyababkeun istirahat di target DNA. Sintésis DNA bakal tetep aya dina sempalan leutik. Nanging, upami situs mineousing leungit dina kaayaan sempalan DNA, ngan ukur amplédikasi linier. Dina kasus anu paling hadé, wangun fraguns tiasa teratur, tapi ngahasilkeun anu bakal aya hubunganana alit sareng tingkat deteksi.
(B) kaleungitan dasar, utamina kusabab deplahan diménsi sareng amimidin, ngabalukarkeun panurunan dina jumlah titik H sareng panurunan dina TM. Salila fase peganculkeun elong dimeunahkeun, préparasi bakal ngalembereh tina matriksem DNA sareng moalimalkeun sacara anéh dina kaayaan anu kirang.
(c) Basmin thymine anu meungkeut bentuk anu diman.
Masalah umum anu seringatna dina Diagnosika molekular anu paling luhur tibatan targét asam nukléat dibandingulasi pikeun ekstraksi klaroftrorm-klarolik. Dina kasus ekstrim, ieu tiasa aya hubunganana sareng negaties anu sunda. Ampin waktos tiasa disimpen ku gal gajih atanapi irisan sél sél, tapi metoda ieu sering nyababkeun sensitipitas klipasi sering nyababkeun asam nukléab.

Ngahambat kagiatan polimérase nalika amplifikasi

Sacara umum, penghibi dipaké salaku konsép alat pikeun ngajelaskeun sagala faktor anu mingpin pikeun kapangmuran subpoptimal. Pikeun akal bokat biokikal, ngahambat diwates kana kagiatan énzim, nyaéta, éta rék panyekosan produk-produk substrat-polaker).
Komponén dina conto atanapi rupa-rupa panyangga sareng ekstrak anu ngandung réaksi tiasa ngahambat énzim atanapi bubu edta), diaku ngarah kana poliméris.
Nanging, seueur interaksi antara komponon réaksi sareng asam nukléat anu ngandung kajadian anu ngandung ukuran ukuran ukuran ogé ditunjuk salaku 'PCTibitor'. Sakali integritas sél kasurindah ku isolasi sareng asam nukléat dirasa, asam nukléat, interaksi antarangan sampel sareng solusi anu umum sareng format buruk na tiasa lumangsung. Salaku conto, slaveners 'tiasa gikat tunggal- atanapi ngagétakna ganda ngalangkungan interupitasi target sareng pemisal listrik tina pipis sareng purtivation sareng ngurangan jumlah réaksi bebis.
Sacara umum, cribitor PC anu aya dina seueur cairan awak sareng régien dianggo pikeun tés didifosik klinis (uréa, glikonan di lingkungan) sareng ion beurat, cangkal

Ahibitor PFRALS anu langkung terbatas tiasa dipendakan dina baktéri sareng sél eukariot,, macomoleka targetna sareng jaringan laboratorium sapertos saluran sareng plastik sapertos kitu tangan. Purnif tina asam nuklét salami atanapi saatos ékstraksi mangrupikeun padika anu dipikaresep pikeun ngaleungitkeun imniboror pcriboror.
Dinten ieu, sadayana pengatural ékspaksi otomatis tiasa ngagentos seueur protokol mandual, tapi 100% pamulihan sareng / atanapi purikakeun target target teu kahontal. Poténsi Hadirim tiasa dituduh dina asam nukat anu dimurnikeun atanapi tiasa parantos dilaksanakeun. Strategi anu béda aya pikeun ngirangan pangaruh sengkir. Pilihan polimérase polimérase anu pas tiasa ngagaduhan pangaruh anu signifikan kana kagiatan ngahambat. Métode kabuktian pikeun ngirangan macul ngalaksanakeun konsentrasi polimérase atanapi nerapkeun aditif sapertos BSA.
Ngahambat réaksi PCC tiasa nunjukkeun ku panggunaan kontrol kualitas internal (IPC).
Élmu kedah dicandak pikeun ngahapus sadayana révési sareng solusi sanés dina kit ékstraksi, sapertos étanol, Énya, Gustior, sareng fénol, guscn atanapi fungol, ahli asam parah. Gumantung kana konsentrasina, aranjeunna tiasa aktipkeun atanapi ngahambat PCC.